Poszycie repliki - Replica plating
Posiew replik to technika mikrobiologiczna , w której jedną lub więcej drugorzędowych płytek Petriego zawierających różne stałe (na bazie agaru ) selektywne podłoża wzrostowe (bez składników odżywczych lub zawierające chemiczne inhibitory wzrostu, takie jak antybiotyki ) zaszczepia się tymi samymi koloniami drobnoustrojów z płytki pierwotnej ( lub danie główne), odtwarzając oryginalny przestrzenny układ kolonii. Technika ta polega na naciśnięciu welwet pokrytego dysku, a następnie odciska pomocniczych płyt z komórkami kolonie usunięto z oryginalnej płytki w materiale. Generalnie, duża liczba kolonii (około 30-300) to replika galwanicznie ze względu na trudności w smugi każdy indywidualnie na osobnej płytce.
Celem wysianie replik na to, aby móc porównać płytkę główną oraz wszelkich pomocniczych płyt, typowo ekran dla pożądanego fenotypu . Na przykład, gdy kolonia, która była obecna na płytce pierwotnej (lub na płytce głównej), nie pojawia się na płytce wtórnej, oznacza to, że kolonia była wrażliwa na substancję na tej konkretnej płytce wtórnej. Powszechnie badane przesiewowo fenotypy obejmują auksotrofię i oporność na antybiotyki .
Powlekanie replik jest szczególnie przydatne w przypadku „ selekcji negatywnej ”. Jednak bardziej słuszne jest odniesienie się do „negatywnego badania przesiewowego” zamiast używania terminu „selekcja”. Na przykład, jeśli ktoś chciałby wyselekcjonować kolonie wrażliwe na ampicylinę , płytka pierwotna mogłaby być replikowana na płytce wtórnej z agarem Amp + . Wrażliwe kolonie na płytce wtórnej zginęły, ale kolonie nadal można było wydedukować z płytki pierwotnej, ponieważ obie mają takie same wzory przestrzenne jak kolonie oporne na ampicylinę. Wrażliwe kolonie można było następnie usunąć z płytki pierwotnej. Często ostatnia płyta będzie nieselektywna. Na figurze, płytka nieselektywna zostanie wysiana po płytce Amp+ w celu potwierdzenia, że brak wzrostu na płytce selekcyjnej jest spowodowany samą selekcją, a nie problemem z przenoszeniem komórek. Jeśli widać wzrost na trzeciej (nieselektywnej) płytce, ale nie na drugiej, czynnik selekcyjny jest odpowiedzialny za brak wzrostu. Jeśli płytka nieselektywna nie wykazuje wzrostu, nie można powiedzieć, czy w ogóle przeniesiono żywe komórki i nie można wyciągnąć żadnych wniosków na temat obecności lub braku wzrostu na pożywce selekcyjnej. Jest to szczególnie przydatne w przypadku pytań dotyczących wieku lub żywotności komórek na oryginalnej płytce.
Zwiększając różnorodność płytek wtórnych za pomocą różnych pożywek selektywnych , można szybko przeszukiwać dużą liczbę pojedynczych izolowanych kolonii pod kątem tylu fenotypów, ile jest płytek wtórnych.
Opracowanie poszycia replik wymagało dwóch kroków. Pierwszym krokiem było zdefiniowanie problemu: metoda identyfikowalnego powielania kolonii. Drugim krokiem było opracowanie sposobu niezawodnej realizacji pierwszego kroku. Replika poszycia została po raz pierwszy opisana przez Esther Lederberg i Joshua Lederberg w 1952 roku. Lederberg starał się użyć tkaniny, którą można było wysterylizować i która miała pionowy stos , podobny do dwuwymiarowej analogowej „szczotki drucianej”, która była klasycznie używana do przenieść kolonie. Papier był niezadowalający, ponieważ „jego boczna kapilarność i ściskanie kolonii zniekształciły i zniszczyły pierwotny wzór wzrostu”, a aksamit nylonowy był zbyt drogi, a jego sztywniejsze włókna powodowały problemy, co prowadziło do wyboru i ostatecznej standaryzacji na bawełniane welwety. Chociaż po raz pierwszy zademonstrowano na bakteriach , powlekanie replik na bazie welwetu stało się również standardową techniką w mikrobiologii eukariontów , takich jak drożdże .