Typowanie tkanek - Tissue typing
Typowanie tkanek to procedura, w której tkanki potencjalnego dawcy i biorcy są badane pod kątem zgodności przed przeszczepem . Niedopasowane tkanki dawcy i biorcy mogą prowadzić do odrzucenia tkanek. Istnieje wiele metod typowania tkanek.
Przegląd
Podczas typowania tkanki identyfikowane są ludzkie antygeny leukocytów (HLA). Cząsteczki HLA są obecne na powierzchni komórek i ułatwiają interakcje między komórkami odpornościowymi (takimi jak komórki dendrytyczne i komórki T ), które prowadzą do adaptacyjnych odpowiedzi immunologicznych . Jeżeli HLA od dawcy zostanie rozpoznane przez układ odpornościowy biorcy jako inne niż własne HLA biorcy, może zostać wywołana odpowiedź immunologiczna przeciwko tkankom dawcy. Dokładniej, niedopasowanie HLA między dawcami i biorcami narządów może prowadzić do rozwoju przeciwciał swoistych dla dawcy anty-HLA (DSA). DSA są silnie związane z odrzuceniem tkanki dawcy u biorcy, a ich obecność jest uważana za wskaźnik odrzucenia za pośrednictwem przeciwciał. Kiedy HLA dawcy i biorcy są dopasowane, jest znacznie większe prawdopodobieństwo, że tkanki dawcy zostaną zaakceptowane przez układ odpornościowy biorcy. Podczas typowania tkanki należy wpisać szereg genów HLA zarówno u dawcy, jak i biorcy, w tym geny HLA klasy I A , B i C , a także geny HLA klasy II DRB1 , DRB3 , DRB4 , DRB5 , DQA1 , DQB1 , DPA1 i geny DPB1 . Typowanie HLA jest utrudnione ze względu na fakt, że region HLA jest najbardziej zmiennym genetycznie regionem w ludzkim genomie.
Metody typowania tkanek
Jedną z pierwszych metod typowania tkanek było typowanie serologiczne. W metodzie tej komórki z krwi dawcy są HLA wpisane przez zmieszanie ich z surowicą zawierającej anty-HLA przeciwciał . Jeśli przeciwciała rozpoznają swój epitop na HLA dawcy, następuje aktywacja dopełniacza, która prowadzi do lizy i śmierci komórek, umożliwiając komórkom pobranie barwnika ( błękit trypanowy ). Pozwala to na identyfikację HLA komórek w oparciu o specyficzność znanych przeciwciał w surowicy. Ta metoda jest szeroko stosowana, ponieważ jest prosta, szybka i tania; jednakże ogromna zmienność alleli HLA oznacza, że surowica zawierająca przeciwciała specyficzne dla HLA badanych komórek może być niedostępna. Typowanie serologiczne nie daje jasnego obrazu regionu HLA i nie zawsze kończy się sukcesem typowania HLA, dlatego wiele laboratoriów przestało go stosować na rzecz bardziej skutecznych metod.
Ostatnio pojawiły się inne bardziej efektywne podejścia, w tym zastosowanie reakcji łańcuchowej polimerazy ( PCR ) opartej na starterach specyficznych dla sekwencji (SSP) lub sondach oligonukleotydowych specyficznych dla sekwencji (SSOP). Jednak SSP-PCR może pochłaniać zarówno czas, jak i zasoby. SSOP-PCR jest lepsza do typowania HLA dużej liczby osób, na przykład dużej liczby dawców do rejestrów szpiku kostnego. RT-PCR to kolejne podejście do typowania HLA, które jest szybkie i wszechstronne, ale jest drogie.
Analiza konformacyjna za pośrednictwem nici odniesienia (RSCA) jest kolejną metodą stosowaną do typowania HLA. W tej metodzie nieznaną próbkę HLA miesza się z allelem referencyjnym i poddaje elektroforezie w żelu . RSCA jest ograniczone przez liczbę dostępnych alleli referencyjnych HLA, ponieważ region HLA jest tak zróżnicowany.
Bezpośrednie sekwencjonowanie DNA, jest obecnie uważana za najlepszy sposób typowania HLA albo poprzez sekwencjonowanie Sangera i następnej generacji sekwencjonowania , choć może to być również czasochłonna i jest jednym z bardziej kosztownych metod. Można również zastosować sekwencjonowanie RNA , ale wiele laboratoriów tego nie robi, ponieważ RNA jest niestabilne i podatne na degradację.