Bejca Ziehla-Neelsena - Ziehl–Neelsen stain

Wizualizacja prątków gruźlicy za pomocą barwienia Ziehla-Neelsena
Barwienie Ziehla–Neelsena (kwasoodporne) – schemat podstawowych kroków

Barwienie Ziehl-Neelsena jest rodzajem barwienia kwasoodpornego, po raz pierwszy wprowadzonego przez Paula Ehrlicha . Barwienie Ziehla-Neelsena jest barwnikiem bakteriologicznym stosowanym do identyfikacji organizmów kwasoopornych , głównie prątków . Jej nazwa pochodzi od dwóch niemieckich lekarzy, którzy zmodyfikowali plamę: bakteriologa Franza Ziehla (1859-1926) i patologa Friedricha Neelsena (1854-1898).

Mykobakterie

W próbkach patologicznych anatomicznie immunohistochemia i modyfikacje barwienia Ziehla-Neelsena (takie jak metoda Fite-Faraco ) mają porównywalną użyteczność diagnostyczną. Obydwa przewyższają tradycyjne barwienie Ziehl-Neelsena.

Rodzaj Mycobacterium to wolno rosnąca bakteria, składająca się z małych pałeczek, które są lekko zakrzywione lub proste i są uważane za Gram-dodatnie. Niektóre typy prątków tworzą gałęzie lub włókna. Niektóre prątki to wolno żyjące saprofity, ale wiele z nich to patogeny wywołujące choroby u zwierząt i ludzi. Mycobacterium bovis powoduje gruźlicę u bydła. Ponieważ gruźlica może przenosić się na ludzi, mleko jest pasteryzowane, aby zabić jakąkolwiek z bakterii. Niektóre gatunki prątków, które powodują choroby u ludzi, obejmują Mycobacterium leprae , Mycobacterium kansasii , Mycobacterium marinum , Mycobacterium bovis , Mycobacterium africanum i członków kompleksu Mycobacterium avium . Mycobacterium tuberculosis to gatunek prątków wywołujących gruźlicę (TB). Mycobacterium tuberculosis to bakteria przenoszona drogą powietrzną, która zazwyczaj infekuje ludzkie płuca. Objawy gruźlicy obejmują przykry kaszel, ból w klatce piersiowej, zmęczenie, utratę wagi, brak apetytu, dreszcze, gorączkę i nocne poty. Typowy schemat leczenia utajonej gruźlicy obejmuje stosowanie izoniazydu, rifapentyny i rifampiny. Schemat jest zmieniony dla tych, u których rozwinął się lekooporny szczep gruźlicy. Testy na gruźlicę obejmują badania krwi, testy skórne i prześwietlenie klatki piersiowej. Patrząc na rozmazy na gruźlicę, jest on barwiony przy użyciu barwnika kwasoodpornego. Te organizmy kwasoodporne, takie jak Mycobacterium, zawierają duże ilości substancji lipidowych w ścianach komórkowych zwanych kwasami mykolowymi. Kwasy te są odporne na barwienie zwykłymi metodami, takimi jak barwienie metodą Grama . Może być również używany do barwienia kilku innych bakterii, takich jak Nocardia . Odczynniki stosowane do barwienia Ziehla-Neelsena to: fuksyna karbolowa , kwaśny alkohol i błękit metylenowy . Prątki kwasoodporne po barwieniu są jaskrawoczerwone.

Grzyby

Barwienie Ziehla-Neelsena jest rodzajem barwienia grzybiczego o wąskim spektrum. Barwy grzybicze o wąskim spektrum są selektywne i mogą pomóc w różnicowaniu i identyfikacji grzybów. Wyniki barwienia Ziehla-Neelsena są zmienne, ponieważ wiele ścian komórkowych grzybów nie jest odpornych na działanie kwasów. Przykładem powszechnego rodzaju grzyba kwasoopornego, który jest zwykle barwiony za pomocą barwienia Ziehl-Neelsena, jest histoplazma (HP). Histoplazma znajduje się w glebie i odchodach ptaków i nietoperzy. Ludzie mogą zarazić się histoplazmozą poprzez wdychanie zarodników grzybów. Histoplazma dostaje się do organizmu i trafia do płuc, gdzie zarodniki zamieniają się w drożdże. Drożdże dostają się do krwiobiegu i wpływają na węzły chłonne i inne części ciała. Zwykle ludzie nie chorują od wdychania zarodników, ale jeśli tak, to zwykle mają objawy grypopodobne. Inną odmianę tej metody barwienia stosuje się w mikologii do zróżnicowanego barwienia kwasoopornych inkrustacji strzępek kutykularnych niektórych gatunków grzybów z rodzaju Russula . Niektóre wolne endospory można pomylić z małymi drożdżami, dlatego barwienie służy do identyfikacji nieznanych grzybów. Jest również przydatny w identyfikacji niektórych pierwotniaków, a mianowicie Cryptosporidium i Isospora . Barwienie Ziehla-Neelsena może również utrudniać diagnozę w przypadku paragonimozy, ponieważ jaja w próbce plwociny dla komórki jajowej i pasożyta (O&P) mogą zostać te z gruźlicy.

Historia

W 1882 Robert Koch odkrył etiologię gruźlicy. Wkrótce po odkryciu Kocha Paul Ehrlich opracował barwnik prątków gruźlicy, zwany barwnikiem hematoksyliną ałunu. Franz Ziehl zmienił następnie technikę barwienia Ehrlicha, stosując kwas karbolowy jako zaprawę. Friedrich Neelsen pozostawił zaprawę wybraną przez Ziehl, ale zmienił barwę podstawową na fuksynę karbolową. Wspólne modyfikacje Ziehla i Neelsena doprowadziły do ​​powstania barwnika Ziehla-Neelsena. Kolejne barwienie kwasooporne zostało opracowane przez Josepha Kinyouna przy użyciu techniki barwienia Ziehl-Neelsena, ale z wyłączeniem etapu ogrzewania z procedury. Ta nowa plama od Kinyoun została nazwana plamą Kinyoun.

Procedura

Typowa procedura barwienia AFB obejmuje upuszczenie komórek w zawiesinie na szkiełko, a następnie wysuszenie na powietrzu płynu i utrwalenie komórek na gorąco.

Podsumowanie barwienia kwasoodpornego (barwienie Ziehl-Neelsena)
Stosowanie Odczynnik Kolor komórki
Kwas szybko Bezkwasowy szybko
Barwnik podstawowy Fuksyna karbolowa czerwony czerwony
Odbarwiacz Alkohol kwaśny czerwony Bezbarwny
Barwienie licznika Błękit metylenowy / zieleń malachitowa czerwony Niebieski

Badania wykazały, że barwienie AFB bez hodowli ma słabą ujemną wartość predykcyjną. Hodowlę AFB należy przeprowadzić wraz z barwieniem AFB; ma to znacznie wyższą negatywną wartość predykcyjną.

Mechanizm barwienia kwasoopornego w komórkach kwasoodpornych i niekwasoodpornych.

Wyjaśnienie mechanizmu

Początkowo fuksyna karbolowa barwi każdą komórkę. Kiedy są odbarwione kwasem i alkoholem, tylko bakterie niekwasoodporne zostają odbarwione, ponieważ nie mają grubej, woskowatej warstwy lipidowej, jak bakterie kwasoodporne. Po nałożeniu barwienia kontrastowego bakterie nieodporne na działanie kwasów wychwytują go i stają się niebieskie (błękit metylenowy) lub zielony (zieleń malachitowa) pod mikroskopem. Bakterie kwasoodporne zatrzymują fuksynę karbolową, dzięki czemu wydają się czerwone.

Modyfikacje

Zobacz też

Przykłady protokołów online

Bibliografia

Bibliografia

  • „Mikrobiologia z chorobami według układu ciała”, Robert W. Bauman, 2009, Pearson Education, Inc.

Linki zewnętrzne