Utajone białko błonowe wirusa Epsteina-Barra 2 - Epstein–Barr virus latent membrane protein 2
Wirus Epsteina-Barra (EBV) utajony błonowych 2 (LMP2) stanowią dwa białka wirusowe z wirusa Epsteina-Barr . LMP2A/LMP2B to białka transbłonowe, które blokują sygnalizację kinazy tyrozynowej . LMP2A jest białkiem transbłonowym, które hamuje prawidłową transdukcję sygnału limfocytów B poprzez naśladowanie aktywowanego receptora limfocytów B (BCR). N-końca domeny LMP2A jest tyrozynowej fosforylacji i współpracownicy z rodziny Src białkowych kinaz tyrozynowych (PTK) oraz śledziony kinazy tyrozynowej ( Syk ). PTK i Syk są związane z transdukcją sygnału BCR .
Struktura i ekspresja genu LMP2
Utajone białko błony 2 (LMP2) jest genem transkrypcyjnym w prawo. Transkrypt LMP2 pochodzi z połączonych powtórzeń końcowych w sekwencjach na przeciwległych końcach genomu . 16–24 godziny po zakażeniu genom ulega cyrkulacji i tworzona jest otwarta ramka odczytu . Komunikaty 1,7 kb i 2,0 kb są tworzone przez użycie alternatywnego promotora i różnią się jedynie sekwencją pierwszego egzonu . Te wiadomości są wyrażane w hodowlach komórek limfoblastoidalnych transformowanych wirusem Epsteina-Barra. Stosunek tych wiadomości jest bardzo zmienny i nieprzewidywalny, co sugeruje niewielką kontrolę koordynacyjną aktywności promotora lub obfitości mRNA . Reszty 497 (LMP2A) i 378 (LMP2B) są kodowane przez te dwie wiadomości. Te dwie izoformy LMP2 różnią się tylko tym, że LMP2A zawiera dodatkową 119-resztową domenę N-końcową kodowaną w eksonie 1. Pierwszy egzon LMP2B jest niekodujący. Zakłada się, że inicjacja translacji ma miejsce w pierwszej dostępnej [metioninie], która jest w ramce w drugim eksonie. Dwanaście segmentów obejmujących błonę zakończonych krótkim 28-resztowym ogonem COOH jest wspólnych dla obu białek w reszcie 379.
Oddziaływania białek LMP2A
119 N-końcowa domena cytoplazmatyczna LMP2A ma kilka motywów, które pośredniczą w interakcjach między białkami, w tym osiem reszt tyrozyny. Dwa motywy, które są wyśrodkowane na Y74 i Y85, są oddalone od siebie o 7 reszt, tworząc motyw immunoreceptorowy oparty na tyrozynie (ITAM) powszechnie występujący w receptorach Fc i cząsteczkach sygnałowych receptorów komórek B i T. Dokowanie receptora z cząsteczkami zawierającymi cytoplazmatyczne kinazy tyrozynowe jest regulowane przez fosforylację motywów ITAM. W hodowlach komórek limfoblastoidalnych, kinazy tyrozynowej Syk stwierdzono w LMP2A immunoprecypitatach następujące in vitro kinazy Syk następnie reakcji przeciwciała reimunnoprecipitation. Doświadczenia z precypitacją powinowactwa wykazały, że Syk oddziałuje z fosforylowanymi peptydami odpowiadającymi kompleksowi LMP2A-ITAM. Reszty wiązania Syk odkryto przez indukcję mutacji punktowych w punkcie Y74F i Y85F. Kinazę tyrozynową LYN wykryto również w immunoprecypitatach z przejściowo transfekowanych komórek B w reszcie Y112. Fosforylacja konstytutywna zachodzi na resztach tyrozyny , seryny i treoniny .
Funkcja LMP2A
Wirus Epsteina-Barra (EBV) określa się przez całe życie utajonego zakażenia w limfocytach B . Wirusowe mRNA LMP2A jest często wykrywane w limfocytach B krwi obwodowej, a białko jest często obecne w biopsjach nowotworu złośliwego EBV. Sugeruje to, że LMP2A odgrywa ważną rolę w latencji wirusa, jak również w progresji chorób związanych z EBV, takich jak chłoniak Burkitta , rak nosogardzieli i chłoniak Hodgkina . Portis i Longnecker (2004) odkryli, że LMP2A indukuje aktywację szlaku Ras komórek B in vivo. Stosując inhibitory downstream komponentów sygnałowych Ras, wykazali, że aktywacja szlaku PI3K / Akt jest zaangażowana w przeżycie limfocytów B za pośrednictwem LMP2A i odporność na apoptozę Caldwell et al. (1998) wykazali zdolność LMP2A do dostarczania sygnałów przeżycia komórkom B in vivo, gdzie ekspresja transgenu LMP2A u myszy zakłóca normalny rozwój komórek B. Powoduje to, że komórki BCR-ujemne są w stanie opuścić szpik kostny i przetrwać w obwodowych narządach limfatycznych. Komórki B z transgenicznej linii E LMP2A ulegają rearanżacji łańcucha lekkiego immunoglobuliny, ale nie rearanżacji łańcucha ciężkiego. Wskazuje to, że sygnalizacja LMP2A omija wymóg rekombinacji immunoglobuliny i umożliwia komórkom typu M-ujemnych immunoglobulin ominięcie apoptozy, umożliwiając im kolonizację obwodowych narządów limfatycznych.
LMP2B
Osiem egzonów izoform LMP2 koduje 12 segmentów obejmujących błonę, które są połączone krótkimi hydrofilowymi pętlami i kończą się 27- aminokwasową cytoplazmatyczną domeną C-końcową . LMP2B, w przeciwieństwie do LMP2A, nie zawiera 119- aminokwasowej cytoplazmatycznej domeny sygnalizacyjnej N-końcowej . Większość badań nad LMP2 koncentruje się na izoformie LMP2A ze względu na jej unikalną ekspresję w latentnie zainfekowanych limfocytach B in situ . Funkcja białka LMP2B jest nieznana. Nie przeprowadzono kompleksowej analizy fenotypowej izoformy LMP2B ze względu na jej hydrofobowy charakter. Podczas gdy rola LMP2B w patogenezie pozostaje niepewna, badania homologii porównujące gen LMP2 EBV z limfokryptowirusem Rhesus i Baboon wykazały , że elementy regulatorowe promotora, reaktywność na jądrowy antygen 2 Epsteina-Barra i zdolność do tworzenia transkryptów LMP2B są zachowane. Oznacza to, że nierozpoznana rola LMP2B w cyklu życia EBV nie została jeszcze ustalona.