Test Coombsa - Coombs test

Test Coombsa
Siatka D003298
MedlinePlus 003344

Testu Coombsa , znany także jako test antyglobulinowy ( AGT ) jest jednym z dwóch testów krwi, stosowanych w immunohematology . Są to bezpośrednie i pośrednie testy Coombsa. Bezpośredni test Coombsa wykrywa przeciwciała przyklejone do powierzchni czerwonych krwinek. Ponieważ te przeciwciała czasami niszczą czerwone krwinki, osoba może być anemiczna, a ten test może pomóc w wyjaśnieniu stanu. Pośredni Coombs wykrywa przeciwciała swobodnie unoszące się we krwi. Te przeciwciała mogą działać przeciwko niektórym czerwonym krwinkom, a test można wykonać w celu zdiagnozowania reakcji na transfuzję krwi .

Bezpośredni test Coombsa służy do badania autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej – czyli stanu, w którym układ odpornościowy rozkłada czerwone krwinki , co prowadzi do anemii . Bezpośredni test Coombsa służy do wykrywania przeciwciał lub białek dopełniacza przyczepionych do powierzchni czerwonych krwinek. W celu wykonania testu pobierana jest próbka krwi, a czerwone krwinki są przemywane (usuwając własne osocze pacjenta i niezwiązane przeciwciała z czerwonych krwinek), a następnie inkubowane z antyludzką globuliną („odczynnik Coombsa”). Jeśli czerwone krwinki ulegną aglutynacji , bezpośredni test Coombsa jest dodatni, co jest wizualną wskazówką, że przeciwciała lub białka dopełniacza są związane z powierzchnią czerwonych krwinek i mogą powodować niszczenie tych komórek.

Pośredni test Coombsa jest stosowany w badaniach prenatalnych kobiet w ciąży oraz w badaniach przed transfuzją krwi. Test wykrywa przeciwciała przeciwko obcym krwinkom czerwonym. W takim przypadku surowica jest pobierana z próbki krwi pobranej od pacjenta. Surowica jest inkubowana z obcymi czerwonymi krwinkami o znanej antygenowości . Na koniec dodaje się antyludzką globulinę. Jeśli wystąpi aglutynacja, pośredni test Coombsa jest dodatni.

Mechanizm

Schemat przedstawiający bezpośrednie i pośrednie testy Coombsa.

Oba testy Coombs są oparte na anty-ludzkich przeciwciał wiążących się z ludzkich przeciwciał, powszechnie IgG lub IgM . Te przeciwciała antyludzkie są wytwarzane przez komórki plazmatyczne zwierząt innych niż ludzie po immunizacji ich ludzkim osoczem . Dodatkowo, te anty-ludzkie przeciwciała będą również wiązać się z ludzkimi przeciwciałami, które mogą być związane z antygenami na powierzchni czerwonych krwinek (RBC). W odpowiednich warunkach w probówkach może to prowadzić do aglutynacji krwinek czerwonych i umożliwić wizualizację powstałych grudek krwinek czerwonych. Jeśli widoczne są grudki, test Coombsa jest pozytywny; jeśli nie, test Coombsa jest ujemny.

Typowe zastosowania kliniczne testu Coombsa obejmują przygotowanie krwi do transfuzji w przekroju dopasowywania , nietypowe przeciwciała w osoczu krwi od ciężarnych kobiet w ramach opieki przedporodowej i wykrywanie przeciwciał dla diagnozy podłożu immunologicznym hemolityczne niedokrwistości .

Testy Coombsa są wykonywane przy użyciu krwinek czerwonych lub surowicy (odpowiednio bezpośredniej lub pośredniej) z próbek żylnej pełnej krwi, które są pobierane od pacjentów przez nakłucie żyły . Krew żylna jest pobierana do laboratorium (lub banku krwi), gdzie przeszkolony personel naukowo-techniczny przeprowadza testy Coombsa. Kliniczne znaczenie wyniku ocenia lekarz, który zlecił wykonanie testu Coombsa, być może z pomocą hematologa laboratoryjnego .

Bezpośredni test Coombsa

Bezpośredni test Coombsa, zwany także bezpośrednim testem antyglobulinowym (DAT), służy do wykrywania, czy przeciwciała lub czynniki układu dopełniacza związały się z antygenami powierzchniowymi RBC . DAT nie jest obecnie wymagany do badań przed transfuzją, ale niektóre laboratoria mogą go włączyć. Przed transfuzją pacjenci często mają pośredni test Coombsa.

Zastosowania

Algorytm dla głównych diagnoz w pozytywnym DAT.

Bezpośredni test Coombsa jest stosowany klinicznie, gdy podejrzewa się niedokrwistość hemolityczną o podłożu immunologicznym (niszczenie krwinek czerwonych za pośrednictwem przeciwciał). Dodatni wynik testu Coombsa wskazuje, że mechanizm odpornościowy atakuje RBC pacjenta . Może to być mechanizm autoimmunologiczny , alloimmunologiczny lub wywołany lekiem mechanizm immunologiczny.

Przykłady hemolizy alloimmunologicznej

Przykłady hemolizy autoimmunologicznej/hemolizy immunohemolitycznej

Hemoliza wywołana lekami o podłożu immunologicznym

  • Metylodopa (nadwrażliwość typu II pośredniczona przez IgG)
  • Penicylina (wysoka dawka)
  • Chinidyna (aktywacja za pośrednictwem IgM klasycznego szlaku dopełniacza i kompleksu ataku błony, MAC)

(A pamięć do zapamiętania że DAT testuje RBC i jest używany do testów dla niemowląt hemolitycznej noworodków choroby jest: R H D isease ; R = RBC, D . = DAT)

Laboratorium

RBC pacjenta są przemywane (usuwając własną surowicę pacjenta ), a następnie odwirowywane z antyludzką globuliną (znaną również jako odczynnik Coombsa). Jeśli czynniki immunoglobulinowe lub dopełniacza zostały przymocowane do powierzchni RBC in vitro , antyludzka globulina spowoduje aglutynację RBC, a bezpośredni test Coombsa będzie dodatni. (W górnej połowie schematu przedstawiono wizualną reprezentację pozytywnego bezpośredniego testu Coombsa).

Pośredni test Coombsa

Pośredni test Coombsa, zwany również pośrednim testem antyglobulinowym (IAT), służy do wykrywania reakcji przeciwciało-antygen in vitro . Służy do wykrywania bardzo niskich stężeń przeciwciał obecnych w osoczu/surowicy pacjenta przed transfuzją krwi. W opiece przedporodowej IAT służy do badania kobiet w ciąży pod kątem przeciwciał, które mogą powodować chorobę hemolityczną noworodka . IAT może być również używany do testowania zgodności , identyfikacji przeciwciał, fenotypowania RBC i badań miareczkowania.

Zastosowania

Przygotowanie do transfuzji krwi

Główne artykuły: transfuzja krwi i dopasowywanie krzyżowe

Pośredni test Coombsa służy do badania przesiewowego pod kątem przeciwciał podczas przygotowywania krwi do transfuzji krwi . Krew dawcy i biorcy musi być zgodna z ABO i Rh D. Krew dawcy do transfuzji jest również badana pod kątem infekcji w oddzielnych procesach.

  • Badanie przesiewowe na obecność przeciwciał

Próbka krwi od biorcy i próbka krwi z każdej jednostki krwi dawcy są badane pod kątem przeciwciał za pomocą pośredniego testu Coombsa. Każda próbka jest inkubowana z szeroką gamą RBC, które razem wykazują pełen zakres antygenów powierzchniowych (tj. grupy krwi ).

  • Dopasowywanie krzyżowe

Pośredni test Coombsa służy do badania próbki surowicy biorcy pod kątem przeciwciał przeciwko próbce krwinek czerwonych dawcy krwi . Nazywa się to czasem krzyżowym dopasowaniem krwi.

Badanie przesiewowe przeciwciał prenatalnych

Pośredni test Coombsa służy do badania kobiet w ciąży pod kątem przeciwciał IgG , które mogą przedostać się przez łożysko do krwi płodu i wywołać chorobę hemolityczną noworodka .

Metoda laboratoryjna

IAT jest testem dwuetapowym. (Dopasowanie krzyżowe jest pokazane wizualnie w dolnej połowie schematu jako przykład pośredniego testu Coombsa).

Pierwszy etap

Przemyte krwinki czerwone (RBC) niepacjenta ze znanymi antygenami są inkubowane z surowicą pacjenta zawierającą nieznaną zawartość przeciwciał. Jeśli surowica zawiera przeciwciała przeciwko antygenom na powierzchni RBC, przeciwciała zwiążą się z powierzchnią RBC.

Drugi etap

RBC są płukane trzy lub cztery razy izotonicznym roztworem soli fizjologicznej, a następnie inkubowane z antyludzką globuliną. Jeśli przeciwciała związały się z antygenami powierzchniowymi RBC w pierwszym etapie, RBC będą aglutynować podczas inkubacji z antyludzką globuliną (znaną również jako odczynnik Coombsa) na tym etapie, a pośredni test Coombsa będzie dodatni.

Miareczkowania

Poprzez rozcieńczenie surowicy zawierającej przeciwciała można zmierzyć ilość przeciwciał w surowicy. Odbywa się to poprzez zastosowanie podwojonych rozcieńczeń surowicy i znalezienie maksymalnego rozcieńczenia surowicy testowej, które jest w stanie wywołać aglutynację odpowiednich krwinek czerwonych.

Odczynnik Coombsa

Odczynnik Coombsa (znany również jako antyglobulina Coombsa lub antyglobulina ludzka ) jest używany zarówno w bezpośrednim teście Coombsa, jak i w pośrednim teście Coombsa. Odczynnik Coombsa jest globuliną antyludzką . Powstaje przez wstrzyknięcie ludzkiej globuliny zwierzętom, które wytwarzają przeciwciała poliklonalne specyficzne dla ludzkich immunoglobulin i czynników ludzkiego układu dopełniacza. Można zastosować bardziej specyficzne odczynniki Coombsa lub przeciwciała monoklonalne .

Nośniki ulepszające

Oba IgM i IgG przeciwciała wiążą się silnie z ich komplementarnymi antygenów. Przeciwciała IgG są najbardziej reaktywne w 37 °C. Przeciwciała IgM są łatwo wykrywane w soli fizjologicznej w temperaturze pokojowej, ponieważ przeciwciała IgM są w stanie łączyć się między RBC dzięki ich dużym rozmiarom, skutecznie tworząc to, co jest postrzegane jako aglutynacja . Przeciwciała IgG są mniejsze i wymagają pomocy, aby mostkować wystarczająco dobrze, aby utworzyć wizualną reakcję aglutynacji . Odczynniki stosowane w celu zwiększenia wykrywania IgG są nazywane potencjatorami. RBC mają ujemny ładunek netto zwany potencjałem zeta, który powoduje, że mają one naturalne odpychanie do siebie. Potencjatory zmniejszają potencjał zeta błon RBC. Powszechne wzmacniacze obejmują roztwór o niskiej sile jonowej (LISS), albuminę , glikol polietylenowy (PEG) i enzymy proteolityczne .

Historia

Test Coombsa został po raz pierwszy opisany w 1945 roku przez immunologów z Cambridge Robina Coombsa (od którego pochodzi nazwa), Arthura Mourant i Roba Race'a . Historycznie robiono to w probówkach . Obecnie powszechnie robi się to przy użyciu technologii mikromacierzy i żelu.

Kultura popularna

W książce Arthura Haileya z 1959 roku Ostateczna diagnoza żona pracownika szpitala jest w ciąży; ona jest Rh ujemna, a on Rh dodatni. Wspomina o tym i zaleca wykonanie pośredniego testu Coombsa nowemu asystentowi patologa, który uważa to za oczywiste, a nawet podpisuje formularz zamówienia, aby zamówić serum Coombsa. Ze względu na skrajne szczypanie grosza przez głównego patologa , lekceważy decyzję drugiego lekarza o zamówieniu surowicy Coombsa i odmawia wykonania pośredniego testu Coombsa, uznając, że same testy białka i soli fizjologicznej są wystarczające. Ta decyzja kończy się tragicznymi konsekwencjami. Filmowa adaptacja powieści "Młodzi lekarze " z 1961 roku opowiada tę historię, ale ze szczęśliwym zakończeniem.

Bibliografia

Linki zewnętrzne