Transferaza - Transferase

Polimeraza RNA z Saccharomyces cerevisiae skompleksowana z α-amanityną (na czerwono). Pomimo stosowania terminu „polimeraza”, polimerazy RNA są klasyfikowane jako forma transferazy nukleotydylowej.

Transferazy oznacza każdy z klasy enzymów , które katalizują przeniesienie poszczególnych grup funkcyjnych (na przykład metyl lub glikozylową grupę) z jedną cząsteczką (zwane dawcy) do drugiego (zwany akceptor). Są zaangażowane w setki różnych ścieżek biochemicznych w całej biologii i są integralną częścią niektórych najważniejszych procesów życiowych.

Transferazy biorą udział w niezliczonych reakcjach w komórce. Trzy przykłady takich reakcji to aktywność transferazy koenzymu A (CoA), która przenosi estry tiolowe , działanie N-acetylotransferazy , która jest częścią szlaku metabolizowania tryptofanu , oraz regulacja dehydrogenazy pirogronianowej (PDH), która przekształca pirogronian do acetylo-CoA . Transferazy są również wykorzystywane podczas tłumaczenia. W tym przypadku łańcuch aminokwasowy jest grupą funkcyjną przenoszoną przez transferazę peptydylową . Przeniesienie obejmuje usuwanie rosnącej aminokwasowej łańcucha z tRNA cząsteczki w A miejscu na rybosomie i następnie dodanie jej do aminokwasu przyłączonej do tRNA do miejsca P .

Pod względem mechanicznym enzym, który katalizowałby następującą reakcję, byłaby transferazą:

${\ Displaystyle Xgroup + Y {\ xrightarrow [{transferaza}] {}} X + Ygroup}$

W powyższej reakcji X byłby dawcą, a Y akceptorem. „Grupa” byłaby grupą funkcyjną przeniesioną w wyniku aktywności transferazy. Dawcą jest często koenzym .

Historia

Niektóre z najważniejszych odkryć związanych z transferazami miały miejsce już w latach 30. XX wieku. Najwcześniejsze odkrycia aktywności transferazy miały miejsce w innych klasyfikacjach enzymów , w tym beta- galaktozydazie , proteazie i fosfatazie kwasowo- zasadowej . Przed uświadomieniem sobie, że poszczególne enzymy są zdolne do takiego zadania, uważano, że dwa lub więcej enzymów dokonuje przeniesienia grup funkcyjnych.

Biodegradacja dopaminy przez katecholo-O-metylotransferazę (wraz z innymi enzymami). Mechanizm degradacji dopaminy doprowadził do Nagrody Nobla w dziedzinie fizjologii lub medycyny w 1970 roku.

Transaminowania lub przejęcie aminy (lub NH ₂ ) grupę z aminokwasu do ketokwasu przez aminotransferazy (znany również jako „transaminazy”) został po raz pierwszy w 1930 roku odnotowano przez Dorota M. Needham , po stwierdzeniu zaniku z kwasu glutaminowego, dodaje się do mięśnia piersiowego gołębi. Spostrzeżenie to zostało później zweryfikowane przez odkrycie mechanizmu reakcji przez Braunsteina i Kritzmanna w 1937 roku. Ich analiza wykazała, że ​​ta odwracalna reakcja może być zastosowana w innych tkankach. To twierdzenie zostało potwierdzone w pracy Rudolfa Schoenheimera z radioizotopami jako wskaźnikami w 1937. To z kolei utorowało drogę do możliwości, że podobne transfery były głównym sposobem wytwarzania większości aminokwasów poprzez transfer aminowy.

Innym przykładem wczesnych badań nad transferazami i późniejszej reklasyfikacji było odkrycie transferazy urydylowej. W 1953 wykazano , że enzym pirofosforylaza UDP-glukozy jest transferazą, kiedy odkryto, że może odwracalnie wytwarzać UTP i G1P z UDP-glukozy i organicznego pirofosforanu .

Innym przykładem znaczenia historycznego dotyczącego transferazy jest odkrycie mechanizmu katecholamin podziale katecholo-O-metylotransferazy . To odkrycie było w dużej mierze powodem przyznania Juliusowi Axelrodowi Nagrody Nobla w 1970 roku w dziedzinie fizjologii lub medycyny (wspólnej z Sir Bernardem Katzem i Ulfem von Eulerem ).

Klasyfikacja transferaz trwa do dziś i często odkrywane są nowe. Przykładem tego jest Pipe, sulfotransferaza zaangażowana we wzorcowanie grzbietowo-brzuszne Drosophilia . Początkowo dokładny mechanizm działania Pipe nie był znany ze względu na brak informacji o jego podłożu. Badania nad aktywnością katalityczną Pipe wyeliminowały prawdopodobieństwo, że jest to glikozaminoglikan siarczanu heparanu. Dalsze badania wykazały, że Pipe ma na celu zasiarczenie struktur jajników. Pipe jest obecnie klasyfikowany jako 2-O-sulfotransferaza siarczanu heparanu Drosophilia .

Nomenklatura

Nazwy systematyczne transferaz są konstruowane w formie „transferaza grupy dawcy:akceptor”. Na przykład standardową konwencją nazewnictwa dla transferazy N-metylotransferaza metyloamino-glutaminianowa byłaby N-metylotransferaza metyloamina:L-glutaminian , gdzie metyloamina jest dawcą, L-glutaminian jest akceptorem, a metylotransferaza jest grupą kategorii EC. To samo działanie transferazy można zilustrować w następujący sposób:

metyloamina + L-glutaminian NH ₃ + N-metylo-L-glutaminian${\displaystyle \rightleftharpoons}$

Jednak inne akceptowane nazwy są częściej używane dla transferaz i często są tworzone jako „transferaza grupy akceptora” lub „transferaza grupy dawcy”. Na przykład metylotransferaza DNA jest transferazą, która katalizuje przeniesienie grupy metylowej na akceptor DNA . W praktyce wiele cząsteczek nie jest określanych tą terminologią ze względu na bardziej rozpowszechnione nazwy zwyczajowe. Na przykład polimeraza RNA to współczesna nazwa zwyczajowa tego, co wcześniej było znane jako nukleotydylotransferaza RNA, rodzaj transferazy nukleotydylowej, która przenosi nukleotydy na koniec 3' rosnącej nici RNA . W systemie klasyfikacji WE przyjętą nazwą polimerazy RNA jest polimeraza RNA kierowana przez DNA.

Klasyfikacja

Opisane głównie na podstawie rodzaju przenoszonej grupy biochemicznej, transferazy można podzielić na dziesięć kategorii (w oparciu o klasyfikację według numeru WE ). Kategorie te obejmują ponad 450 różnych unikalnych enzymów. W systemie numeracji EC transferazom nadano klasyfikację EC2 . Wodór nie jest uważany za grupę funkcyjną, jeśli chodzi o cele transferazy; zamiast tego przeniesienie wodoru jest zawarte w oksydoreduktazach , ze względu na względy przeniesienia elektronów.

Rola

EC 2.1: transferazy jednowęglowe

Reakcja z udziałem transkarbamylazy asparaginianowej.

EC 2.1 obejmuje enzymy przenoszące grupy jednowęglowe. Ta kategoria obejmuje transfery grup metylowych , hydroksymetylowych , formylowych, karboksylowych, karbamoilowych i amidowych. Na przykład karbamoilotransferazy przenoszą grupę karbamoilową z jednej cząsteczki na drugą. Grupy karbamoilowe śledzić wzorze NH ₂ CO. W ATCase takie przeniesienie jest zapisany jako karbamoilo fosforan + L- asparaginian L-asparaginian + karbamoil fosforan . ${\displaystyle \rightarrow}$

EC 2.2: transferazy aldehydowe i ketonowe

Reakcja katalizowana przez transaldolazę

Enzymy przenoszące grupy aldehydowe lub ketonowe zawarte w EC 2.2. Ta kategoria obejmuje różne transketolazy i transaldolazy. Transaldolaza, imiennik transferaz aldehydowych, jest ważną częścią szlaku pentozofosforanowego. Reakcja, którą katalizuje, polega na przeniesieniu dihydroksyacetonowej grupy funkcyjnej do 3-fosforanu aldehydu glicerynowego (znanego również jako G3P). Reakcja jest następująca: sedoheptuloza 7-fosforan + gliceroaldehyd 3-fosforan erytroza 4-fosforan + fruktoza 6-fosforan . ${\displaystyle \rightleftharpoons}$

EC 2.3: transferazy acylowe

Przenoszenie grup acylowych lub grup acylowych, które stają się grupami alkilowymi podczas procesu przenoszenia, są kluczowymi aspektami EC 2.3. Ponadto w tej kategorii rozróżnia się również grupy aminoacylowe i nieaminoacylowe. Transferaza peptydylowa jest rybozymem, który ułatwia tworzenie wiązań peptydowych podczas translacji . Jako aminoacylotransferaza katalizuje przeniesienie peptydu na aminoacylo-tRNA w wyniku tej reakcji: peptydylo-tRNA _A + aminoacylo-tRNA _B tRNA _A + peptydylo-aminoacylo-tRNA _B . ${\displaystyle \rightleftharpoons}$

EC 2.4: transferazy glikozylowe, heksozylowe i pentozylowe

EC 2.4 obejmuje enzymy przenoszące grupy glikozylowe , a także przenoszące heksozę i pentozę. Glikozylotransferaz jest podkategorii EC 2.4 transferaz, który uczestniczy w biosyntezie w disacharydów oraz polisacharydów poprzez przeniesienie monosacharydów do innych cząsteczek. Przykładem znaczącej glikozylotransferazy jest syntaza laktozy, która jest dimerem posiadającym dwie podjednostki białkowe . Jego podstawowym działaniem jest wytwarzanie laktozy z glukozy i UDP-galaktozy. Zachodzi to następującym szlakiem: UDP-β-D-galaktoza + D-glukoza UDP + laktoza. ${\displaystyle \rightleftharpoons}$

EC 2.5: transferazy alkilowe i arylowe

EC 2.5 dotyczy enzymów przenoszących grupy alkilowe lub arylowe, ale nie obejmuje grup metylowych. Jest to w przeciwieństwie do grup funkcyjnych, które stają się grupami alkilowymi po przeniesieniu, ponieważ są one zawarte w EC 2.3. EC 2.5 posiada obecnie tylko jedną podklasę: transferazy alkilowe i arylowe. Na przykład syntaza cysteinowa katalizuje tworzenie kwasów octowych i cysteiny z O ₃ -acetylo-L-seryny i siarkowodoru: O ₃ -acetylo-L-seryna + H ₂ S L-cysteina + octan. ${\displaystyle \rightleftharpoons}$

EC 2.6: transferazy azotowe

Aminotransferaza asparaginianowa może oddziaływać na kilka różnych aminokwasów

Grupowanie zgodne z przeniesieniem grup azotowych to EC 2.6. Obejmuje to enzymy takie jak transaminaza (znana również jako „aminotransferaza”) oraz bardzo niewielka liczba oksyminotransferaz i innych enzymów przenoszących grupy azotowe. EC 2.6 wcześniej obejmowała amidynotransferazę, ale od tego czasu została przeklasyfikowana jako podkategoria EC 2.1 (enzymy przenoszące pojedynczy węgiel). W przypadku transaminazy asparaginianowej , która może oddziaływać na tyrozynę , fenyloalaninę i tryptofan , odwracalnie przenosi grupę aminową z jednej cząsteczki do drugiej.

Reakcja przebiega na przykład w następującym porządku: L-asparaginian + 2-oksoglutaran szczawiooctan + L-glutaminian. ${\displaystyle \rightleftharpoons}$

EC 2.7: transferazy fosforowe

Chociaż EC 2.7 obejmuje enzymy przenoszące grupy zawierające fosfor , obejmuje również transferazy nuklotydylowe. Podkategoria fosfotransferaza jest podzielona na kategorie w zależności od rodzaju grupy, która akceptuje transfer. Grupy sklasyfikowane jako akceptory fosforanowe obejmują: alkohole, grupy karboksylowe, grupy azotowe i grupy fosforanowe. Dalszymi składnikami tej podklasy transferaz są różne kinazy. Znaczącą kinazą jest kinaza zależna od cykliny (lub CDK), która obejmuje podrodzinę kinaz białkowych . Jak sama nazwa wskazuje, CDK są silnie zależne od specyficznych cząsteczek cyklin do aktywacji . Po połączeniu kompleks CDK-cyklina jest zdolny do pełnienia swojej funkcji w cyklu komórkowym.

Reakcja katalizowana przez CDK jest następująca: ATP + docelowe białko ADP + fosfoproteina. ${\displaystyle \rightarrow}$

EC 2.8: transferazy siarkowe

Schemat wstęgowy wariantowej struktury sulfotransferazy estrogenowej (PDB 1aqy EBI)

Przenoszenie grup zawierających siarkę jest objęte EC 2.8 i dzieli się na podkategorie: sulfurtransferazy, sulfotransferazy i CoA-transferazy, a także enzymy przenoszące grupy alkilotio. Specyficzną grupą sulfotransferaz są te, które wykorzystują PAPS jako donor grupy siarczanowej. W tej grupie znajduje się sulfotransferaza alkoholowa, która ma szerokie możliwości celowania. Z tego powodu sulfotransferaza alkoholowa jest również znana pod kilkoma innymi nazwami, w tym „sulfotransferaza hydroksysteroidowa”, „sulfokinaza steroidowa” i „sulfotransferaza estrogenowa”. Spadek jego aktywności powiązano z chorobą wątroby człowieka. Ta transferaza działa poprzez następującą reakcję: siarczan 3'- fosfoadenylilu + 3',5'bisfosforan adenozyny alkoholu + siarczan alkilu. ${\displaystyle \rightleftharpoons}$

EC 2.9: transferazy selenowe

EC 2.9 obejmuje enzymy przenoszące grupy zawierające selen . Ta kategoria zawiera tylko dwie transferazy, a zatem jest jedną z najmniejszych kategorii transferaz. Syntaza selenocysteiny, która po raz pierwszy została dodana do systemu klasyfikacji w 1999 roku, przekształca serylo-tRNA (Sec UCA) w selenocysteylo-tRNA (Sec UCA).

EC 2.10: transferazy metali

Kategoria EC 2.10 obejmuje enzymy przenoszące grupy zawierające molibden lub wolfram . Jednak od 2011 roku dodano tylko jeden enzym: molibdotransferazę molibdopteryny . Enzym ten jest składnikiem biosyntezy MoCo w Escherichia coli . Reakcja, którą katalizuje jest następująca: adenylylo- molibdopteryna + kofaktor molibdenianowo- molibdenowy + AMP. ${\displaystyle \rightarrow}$

Rola w grupie krwi historycznej

Transferazy A i B są podstawą ludzkiego układu grup krwi ABO . Obie transferazy A i B są glikozylotransferazami, co oznacza, że ​​przenoszą cząsteczkę cukru na antygen H. Pozwala to antygenowi H na syntezę koniugatów glikoproteiny i glikolipidu , znanych jako antygeny A/B . Pełna nazwa transferazy A to alfa 1-3-N-acetylogalaktozaminylotransferaza, a jej funkcją w komórce jest dodanie N-acetylogalaktozaminy do antygenu H, tworząc antygen A. Pełna nazwa transferazy B to alfa 1-3-galaktozylotransferaza, a jej funkcją w komórce jest dodanie cząsteczki galaktozy do antygenu H, tworząc antygen B.

Możliwe jest, Homo sapiens , aby każdy z czterech grup krwi : Typ A (ekspresjonują antygeny), typ B (ekspresji antygenów B), typu AB (wyrażają zarówno antygeny A i B), a typ O (wyrazić ani ani B antygeny). Gen transferaz A i B znajduje się na chromosomie 9 . Gen zawiera siedem eksonów i sześć intronów, a sam gen ma ponad 18 kb długości. Allele transferaz A i B są bardzo podobne. Powstałe enzymy różnią się tylko 4 resztami aminokwasowymi. Różne reszty znajdują się w pozycjach 176, 235, 266 i 268 w enzymach.

Niedobory

E. coli galaktozo-1-fosforan urydylotransferaza. Niedobór ludzkiej izoformy tej transferazy powoduje galaktozemię

.

Niedobory transferazy leżą u podstaw wielu powszechnych chorób . Najczęstszym skutkiem niedoboru transferazy jest nagromadzenie produktu komórkowego .

Niedobór SCOT

Niedobór transferazy sukcynylo-CoA:3-ketokwasu CoA (lub niedobór SCOT ) prowadzi do nagromadzenia ketonów . Ketony powstają w wyniku rozpadu tłuszczów w organizmie i są ważnym źródłem energii. Niezdolność do wykorzystania ketonów prowadzi do okresowej kwasicy ketonowej , która zwykle pojawia się po raz pierwszy w okresie niemowlęcym. Osoby cierpiące na choroby doświadczają nudności, wymiotów, niezdolności do jedzenia i trudności z oddychaniem. W skrajnych przypadkach kwasica ketonowa może prowadzić do śpiączki i śmierci. Niedobór spowodowany jest mutacją w genie OXCT1. Zabiegi w większości polegają na kontrolowaniu diety pacjenta.

Niedobór CPT-II

Niedobór palmitoilotransferazy karnityny II (znany również jako niedobór CPT-II ) prowadzi do nadmiaru długołańcuchowych kwasów tłuszczowych , ponieważ organizm nie ma zdolności do transportu kwasów tłuszczowych do mitochondriów w celu ich przetworzenia jako źródła paliwa. Choroba jest spowodowana defektem w genie CPT2. Niedobór ten objawia się u pacjentów na jeden z trzech sposobów: śmiertelna postać noworodkowa, ciężka postać niemowlęca wątrobowo-mięśniowa i miopatyczna. Miopatia jest najmniej ciężką postacią niedoboru i może objawiać się w dowolnym momencie życia pacjenta. Pozostałe dwie formy pojawiają się w dzieciństwie. Typowymi objawami śmiertelnej postaci noworodkowej i ciężkich postaci niemowlęcych są niewydolność wątroby, problemy z sercem, drgawki i śmierć. Postać miopatyczna charakteryzuje się bólem mięśni i osłabieniem po intensywnych ćwiczeniach. Leczenie na ogół obejmuje modyfikacje diety i suplementy karnityny.

Galaktozemia

Galaktozemia wynika z niezdolności do przetwarzania galaktozy, cukru prostego . Ten niedobór występuje, gdy gen urydylilotransferazy galaktozo-1-fosforanowej (GALT) ma dowolną liczbę mutacji, co prowadzi do niedoboru ilości wytwarzanego GALT. Istnieją dwie formy galaktozemii: klasyczna i Duarte. Galaktozemia Duarte jest na ogół mniej ciężka niż klasyczna galaktozemia i jest spowodowana niedoborem galaktokinazy . Galaktozemia uniemożliwia niemowlętom przetwarzanie cukrów zawartych w mleku matki, co prowadzi do wymiotów i anoreksji w ciągu kilku dni po urodzeniu. Większość objawów choroby jest spowodowana gromadzeniem się galaktozy-1-fosforanu w organizmie. Typowe objawy to między innymi niewydolność wątroby, posocznica , brak wzrostu i upośledzenie umysłowe. Nagromadzenie drugiej toksycznej substancji, galaktytolu , pojawia się w soczewkach oczu, powodując zaćmę . Obecnie jedyną dostępną terapią jest wczesna diagnoza, a następnie przestrzeganie diety pozbawionej laktozy i przepisywanie antybiotyków na infekcje, które mogą się rozwinąć.

Niedobory acetylotransferazy cholinowej

Acetylotransferaza choliny (znana również jako ChAT lub CAT) jest ważnym enzymem, który wytwarza neuroprzekaźnik acetylocholinę . Acetylocholina bierze udział w wielu funkcjach neuropsychicznych, takich jak pamięć, uwaga, sen i pobudzenie. Enzym ma kulisty kształt i składa się z pojedynczego łańcucha aminokwasowego. ChAT funkcje w celu przeniesienia grupy acetylowej z acetylo-koenzym A z choliny w synapsach w nerwowych komórek i występuje w dwóch postaciach: rozpuszczalny i związany z błoną. Gen ChAT znajduje się na chromosomie 10 .

Choroba Alzheimera

Zmniejszona ekspresja ChAT jest jedną z cech charakterystycznych choroby Alzheimera . Pacjenci z chorobą Alzheimera wykazują 30 do 90% zmniejszenie aktywności w kilku obszarach mózgu, w tym w płacie skroniowym , ciemieniowym i czołowym . Nie uważa się jednak, aby niedobór ChAT był główną przyczyną tej choroby.

Stwardnienie zanikowe boczne (ALS lub choroba Lou Gehriga)

Pacjenci z ALS wykazują wyraźny spadek aktywności ChAT w neuronach ruchowych w rdzeniu kręgowym i mózgu . Niski poziom aktywności ChAT jest wczesnym wskaźnikiem choroby i jest wykrywalny na długo przed obumieraniem neuronów ruchowych. Można to nawet wykryć, zanim u pacjenta pojawią się objawy .

choroba Huntingtona

Pacjenci z chorobą Huntingtona wykazują również wyraźny spadek produkcji ChAT. Chociaż konkretna przyczyna zmniejszonej produkcji nie jest jasna, uważa się, że śmierć średnich neuronów ruchowych z kolczastymi dendrytami prowadzi do niższych poziomów produkcji ChAT.

Schizofrenia

Pacjenci ze schizofrenią wykazują również obniżony poziom ChAT, zlokalizowany w nakrywce mezopontynowej mózgu i jądrze półleżącym , co, jak się uważa, koreluje z obniżonym funkcjonowaniem poznawczym doświadczanym przez tych pacjentów.

Zespół nagłej śmierci niemowląt (SIDS)

Ostatnie badania wykazały, że niemowlęta z SIDS wykazują obniżony poziom ChAT zarówno w podwzgórzu, jak iw prążkowiu . Niemowlęta z SIDS wykazują również mniej neuronów zdolnych do wytwarzania ChAT w układzie błędnym. Te wady rdzenia mogą prowadzić do niemożności kontrolowania podstawowych funkcji autonomicznych, takich jak układ sercowo - naczyniowy i oddechowy .

Wrodzony zespół miasteniczny (CMS)

CMS to rodzina chorób, które charakteryzują się defektami w przekaźnictwie nerwowo-mięśniowym, które prowadzą do nawracających napadów bezdechu (niezdolność oddychania), które mogą być śmiertelne. Niedobór ChAT jest powiązany z zespołami miastenii, w których problem przejścia występuje presynaptycznie . Zespoły te charakteryzują się niezdolnością pacjentów do ponownej syntezy acetylocholiny .

Zastosowania w biotechnologii

Transfery terminalowe

Transferazy terminalne to transferazy, które można stosować do znakowania DNA lub do wytwarzania wektorów plazmidowych . Realizuje oba te zadania, dodając deoksynukleotydy w postaci matrycy do dolnego końca lub końca 3' istniejącej cząsteczki DNA. Transferaza terminalna jest jedną z niewielu polimeraz DNA, które mogą działać bez startera RNA.

Transferazy glutationowe

Rodzina transferaz glutationowych (GST) jest niezwykle zróżnicowana i dlatego może być wykorzystywana do wielu celów biotechnologicznych. Rośliny wykorzystują transferazy glutationowe jako środek do oddzielania metali toksycznych od reszty komórki. Te transferazy glutationowe można wykorzystać do tworzenia bioczujników do wykrywania zanieczyszczeń, takich jak herbicydy i insektycydy. Transferazy glutationowe są również stosowane w roślinach transgenicznych w celu zwiększenia odporności zarówno na stres biotyczny, jak i abiotyczny. Transferazy glutationowe są obecnie badane jako cele dla leków przeciwnowotworowych ze względu na ich rolę w lekooporności . Ponadto zbadano geny transferazy glutationowej ze względu na ich zdolność do zapobiegania uszkodzeniom oksydacyjnym i wykazały zwiększoną odporność u odmian transgenicznych .

Transferazy gumowe

Obecnie dostępne tylko Handlowym źródłem naturalnego kauczuku jest Hevea roślin ( Hevea brasiliensis ). Kauczuk naturalny jest lepszy od kauczuku syntetycznego w wielu zastosowaniach komercyjnych. Czynione są starania, aby wyprodukować transgeniczne rośliny zdolne do syntezy naturalnej gumy, w tym tytoniu i słonecznika . Wysiłki te koncentrują się na sekwencjonowaniu podjednostek kompleksu enzymu transferazy kauczukowej w celu transfekcji tych genów do innych roślin.

Transferazy związane z błoną

Wiele transferaz wiąże się z błonami biologicznymi jako białka błon obwodowych lub zakotwiczone do błon przez pojedynczą helisę transbłonową , na przykład liczne glikozylotransferazy w aparacie Golgiego . Niektóre inne to wieloprzęsłowe białka transbłonowe , na przykład niektóre oligosacharylotransferazy lub mikrosomalna S-transferaza glutationowa z rodziny MAPEG .

Bibliografia